Banskota和Raguram等在《细胞》一书中描述了工程化无DNA病毒样颗粒（free virus-like particle, VLP）的产生，这些颗粒可高效、安全地为疾病小鼠模型提供治疗水平的BE。

碱基编辑器（base editor, BE）介导靶向的单核苷酸替换而不需要双链DNA断裂，有可能大量减少已知的致病性单核苷酸变体。然而，实现BE在体内安全和高效的传递可能是一个挑战。Banskota和Raguram等在《细胞》一书中描述了工程化无DNA病毒样颗粒（free virus-like particle, VLP）的产生，这些颗粒可高效、安全地为疾病小鼠模型提供治疗水平的BE。

在体内传递BEs的现有方法通常包括使用病毒将BE编码的DNA传递到靶组织。然而，这种策略面临许多挑战，包括有可能将致癌病毒载体整合到转导细胞基因组。由于DNA编码编辑剂在转导细胞中长时间表达，病毒方法也会增加脱靶（off-target）编辑的风险。脂质纳米粒（lipid nanoparticle, LNP）也被用于将BE编码的mRNA输送到肝脏，但LNP输送到其他器官更加困难。

Banskota和Raguram等因此着手研究一种替代的传递方法：使用VLP传递BE核糖核蛋白（BE ribonucleoprotein, RNP）。VLP是有效进入细胞但缺乏病毒遗传物质的病毒蛋白质的集合，从而防止引起病毒感染或病毒载体基因组整合的可能性。RNP在细胞中的生存期很短，限制了脱靶编辑的机会。

作者假设逆转录病毒将是工程化BE-VLP的一个有吸引力的架构：以前的研究表明，某些逆转录病毒支持VLP的形成，甚至在体外传递Cas9 RNP，尽管使用这种方法实现在体内有效编辑迄今遥不可及。在最初的BE-VLP产生之后，Banskota和Raguram等确定了VLP传递效率的关键瓶颈。对BE-VLP进行广泛的系统工程化，以改善VLP成熟后的释放、定位和装载到VLP中，以及VLP的组分化学计量，最终形成了第四代工程化VLP（eVLP），与初始设计相比，蛋白质负载量提高了19倍，编辑效率提高了26倍。

体外和离体研究表明，eVLP在多种细胞类型（包括多个永生化细胞系、人和小鼠的原代成纤维细胞以及人的原代T细胞）中高效地进行靶向腺嘌呤碱基编辑，而脱靶编辑或DNA整合最少。

为了开始评估eVLP的体内疗效，作者首先研究了它们在小鼠中枢神经系统内进行碱基编辑的能力。在小鼠Dnmt1中装载沉默突变的eVLP通过新生儿脑室注射传递。令人鼓舞的是，注射3周后，在暴露于eVLP的皮层和中脑细胞中观察到53%和55%的编辑。

接下来，作者研究了eVLP在成年动物中介导治疗性碱基编辑的能力。在老鼠身上，他们首先开始破坏Pcsk9基因，这是一种治疗家族性高胆固醇血症的策略。单次静脉注射靶向Pcsk9外显子1和内含子1边界的eVLP，导致肝脏中63%的编辑，导致血清Pcsk9蛋白水平降低78%。重要的是，编辑效率与其他最先进的递送系统相当，但没有肝毒性或其他由LNP引发的不良反应。此外，没有检测到脱靶编辑，这是对现有病毒传递方法的改进。

同样，在遗传性视网膜疾病Leber先天性黑蒙的成年小鼠模型中，单次视网膜下注射eVLP可高效且特异性地纠正Rpe65中致病点突变，导致视觉功能部分恢复。

综上所述，这些发现建立了eVLP作为一个有希望的平台，在体内高效、安全地传递治疗性基因编辑剂。

参考文献：Sarah Crunkhorn. Enhancing base editor delivery[J]. Nature Reviews,2022,21:177.